中文名稱(chēng)：BRAF抑制劑(BRAF inhibitor) 英文名稱(chēng)：BRAF inhibitor 產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg 產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X8479 BRAF抑制劑對(duì)BRAF有很好抑制活性。 注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ ：918505-61-0 純度：98.91% 分子量：456.47 儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備： 1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細(xì)胞處理： 1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法： 1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。 大鼠 GP1BB 基因全長(zhǎng)ORF克隆LEIBOVITZ’S L15培養(yǎng)基 1/10升（片劑） 大鼠 CDH5 基因全長(zhǎng)ORF克隆ISCOVE’S MDM培養(yǎng)基 1/10升（片劑） 大鼠 CD6 基因全長(zhǎng)ORF克隆GRACE’S 昆蟲(chóng)培養(yǎng)基 1/10升（片劑） 兔 CD38 基因全長(zhǎng)ORF克隆胚胎干細(xì)胞（ES）基礎(chǔ)培養(yǎng)基 500毫升 兔 CD3E 基因全長(zhǎng)ORF克隆小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）*培養(yǎng)基 500毫升 食蟹猴 IGFBP5 基因全長(zhǎng)ORF克隆胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)因子 5毫升 食蟹猴 FGF11 基因全長(zhǎng)ORF克隆胚胎干細(xì)胞基質(zhì)膠溶液 10毫升 食蟹猴 IL4 基因全長(zhǎng)ORF克隆胚胎干細(xì)胞補(bǔ)充培養(yǎng)基 100毫升 食蟹猴 IL8 基因全長(zhǎng)ORF克隆人體胚胎干細(xì)胞條件培養(yǎng)基 100毫升 食蟹猴 IL1R1 基因全長(zhǎng)ORF克隆人體胚胎干細(xì)胞*培養(yǎng)基 100毫升 食蟹猴 ADAM8 基因全長(zhǎng)ORF克隆小鼠胚胎干細(xì)胞*培養(yǎng)基 100毫升 BRAF抑制劑(BRAF inhibitor)60U Poly（U）聚合 Poly(U) Polymerase -20℃保存 125mL Phosphate Buffered RIPA with Glycerol，2X Phosphate Buffered RIPA with Glycerol，2X 常溫保存 1000次 免質(zhì)粒提取篩選試劑盒 Single Colony Screening Kit -20℃保存 2 ug pOTB7 PPP2R5C pOTB7 PPP2R5C 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 雙水解肉湯 20支 1瓶 Y79細(xì)胞株 Y79 低溫運(yùn)輸和保存 T1N3肉湯 T1N3 Broth 250g 25g L- 谷 L-Glutamine 室溫干燥保存 50T 脊髓灰質(zhì)炎病毒1型PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.1mg 山羊抗小鼠IgG，異硫酸熒光素標(biāo)記 Goat Anti-Mouse IgG ,FITC Conjugate 4℃保存 2 ug pBKS-c-Myc pBKS-c-Myc 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí). 2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
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